|
透射電鏡取材注意事項生物樣品透射電鏡取材注意事項 取材是電鏡實(shí)驗的第一步，其操作成功與否直接關(guān)系到電鏡結果的效果 及成敗。為了得到好的結果，請務(wù)必按要求做好取材！取材基本要點(diǎn)：快 （1min）、冷（4 ℃）、�。�1 mm3）、凈（無(wú)雜質(zhì)）、準（部位準確）。不 同的樣品，取材細節上有很大區別，有任何疑問(wèn)，請掃描右方二維碼，即可 獲得專(zhuān)業(yè)一對一電鏡實(shí)驗及解圖指導！ 一、動(dòng)物組織取材流程及要求 取材流程：動(dòng)物麻醉或斷頭急性處死，解剖取出所需的器官或組 織，生理鹽水簡(jiǎn)單沖洗血液及組織液。按要求將組織切成1mm3左 右小塊，固定于組織及細胞電鏡專(zhuān)用2.5%戊二醛固定液。 取材要求： 1、位置：肝、肺、脾等無(wú)需定位組織取1mm3組織，3-5塊；需要定位組織如骨骼肌、腎、腸、血管、胰島等組織取材大小為0.5mm× 1mm×3mm左右的長(cháng)條狀，且保證觀(guān)察結構在組織塊中。 2、操作：試劑、容器、器械提前4℃預冷；組織離體后，1min內浸 入戊二醛固定液。取材時(shí)，可提前準備一個(gè)載玻片（硬卡紙），滴 幾滴戊二醛固定液，把標本浸在液滴中修整至合適大�。〞r(shí)間可稍 長(cháng)），用牙簽挑出 3～5 粒標本，放入1.5ml尖頭EP管。將修整好的 標本塊放入戊二醛固定液后，普通 4℃冰箱保存。
二、細胞取材流程及要求 取材流程：細胞直接刮下（不可胰酶消化，會(huì )造成細胞損傷），細胞 懸液離心，棄上清，PBS 洗2次（敏感的細胞直接固定，不洗），低速 （1000-3000rpm）離心成團，加入組織及細胞電鏡專(zhuān)用2.5%戊二醛固定 液 4℃過(guò)夜后快遞。懸浮細胞、菌液可直接視為細胞懸浮液操作。固體 培養基培養的菌可直接將菌落挑到PBS中，后續操作一致。 取材要求： 1、細胞數量充足（6cm 或10cm 皿長(cháng)滿(mǎn)），離心后在ep管中綠豆大��； 2、緩沖液、戊二醛固定液等PH值7.3-7.4，4℃提前預冷； 3、貼壁細胞連著(zhù)培養基用細胞刮斜著(zhù)快速刮下，不要反復來(lái)回刮； 4、細胞懸液轉入離心管，1000-3000rpm離心成團，棄上清，加PBS，將細胞轉入1.5ml尖頭 ep管，再次離心后棄上清。再加PBS重復上述步驟，最后加2.5%戊二醛固定，4℃保存。操作 輕柔，盡量保證細胞不散開(kāi)。(轉速及時(shí)間請結合細胞情況，盡量低轉速、短時(shí)間，以細胞 離心成團為準�。≒BS 清洗時(shí)間過(guò)長(cháng)，易造成細胞損傷)； 三、植物組織取材及要求 取材流程：PBS沖洗樣品，確保無(wú)泥沙等污染物。然后用鋒利刀片或剪刀將 樣品切成合適大小，裝入預冷的植物及細菌電鏡專(zhuān)用2.5%戊二醛中。不需要定位的樣品切成1立方毫米大�。ㄈ缛~片、果實(shí)、花粉等），需要定位的 樣品，切成0.5mm×1mm×3mm的長(cháng)條狀（莖、根、表皮等）隨后抽氣，讓組織能沉淀到管底。（簡(jiǎn)易抽氣方法：將植物組織同固定液一起倒入注射器， 用乳膠手套食指堵住注射器出口，右手拉動(dòng)針栓，將注射器口垂直向上， 松開(kāi)食指，右手輕推針栓使液面上的氣泡從注射器口排出，反復多 次，直 至組織沉入固定液。）
四、其他樣品 懸浮細胞、細菌可視為細胞懸液操作。固體培養的細菌，可視為被切小的組織塊，直接用牙 簽挑取3-5個(gè)菌落即可。外泌體、納米材料、脂質(zhì)體、病毒顆粒等負染樣品，根據樣品特 點(diǎn)，固定或不固定后合適條件運輸。具體可咨詢(xún)工作人員。 五、樣本儲存運輸標準： 儲存：樣本取材后，4℃保存時(shí)間不超過(guò)1個(gè)月。 運輸：固定液充滿(mǎn)EP管，封口膜封口，氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋 的方式運輸，冰袋2-3個(gè)（-20℃冰袋，不要太多），一定要與樣品隔開(kāi)。特殊樣品 如脂肪、植物等，用紗布將樣品壓到液面以下，保證充分固定。（下圖1）
六、郵寄地址： 電話(huà)號碼：劉振 18317038349 業(yè)務(wù)郵箱：biofcen@163.com 地址：湖北省武漢市洪山區高新四路 40 號葛洲壩.太陽(yáng)城 18 棟304-1(北 1) 網(wǎng)址：www.suoshikou.com 部分例圖展示：
|
