細菌透射電鏡取材實(shí)驗注意事項

1、細菌取材原則：

  細菌樣品結構簡(jiǎn)單，一般分為液體培養及固定培養，觀(guān)察又分為常規透射電鏡或負染觀(guān)察。取材時(shí)要區分對待。取材前，先查閱文獻，明確實(shí)驗目的，設計好實(shí)驗流程，熟悉超微結構及分布，對需要觀(guān)察的結構及特點(diǎn)需要有自己的判斷。另外，戊二醛會(huì )影響抗原活性，如果課題需要做免疫性的實(shí)驗，取材時(shí)需要用不同的固定液固定。固定對取材用器材及試劑，進(jìn)行清潔及預冷，寫(xiě)好取材的標簽。取材時(shí)，務(wù)必做到相同條件下取材，相同人員平行操作。固定液一般為2.5%電鏡專(zhuān)用戊二醛。

2、細菌取材操作方法：

  2.1、對于觀(guān)察細菌鞭毛、菌毛、納米材料附著(zhù)于細菌的樣品:采用液體培養基培養。因為鞭毛容易脫落，在操作時(shí)盡量輕柔。對于能自然沉淀的細菌，可直接取細菌沉淀，PBS清洗2次，清洗時(shí)也讓細菌自然沉淀不要離心，操作會(huì )殘留部分培養基，但影響較小。如果細菌不能自然沉淀，只能低速離心，取沉淀固定。但是對于鞭毛易脫落的細菌，會(huì )有較大影響，我們會(huì )優(yōu)先選擇新鮮菌液進(jìn)行實(shí)驗。然后用2.5%戊二醛固定，4℃保存運輸。送樣時(shí)，同時(shí)提供新鮮菌液及戊二醛固定的菌液。

  2.2、對于觀(guān)察細菌內部結構的樣品：

  2.2.1、如果是液體培養基培養的細菌，可直接離心，棄上清，沉淀用PBS洗2次，加2.5%戊二醛固定。如果需要觀(guān)察到材料在細菌上的附著(zhù)，操作盡量輕柔，能自然沉淀就不要離心。且清洗的時(shí)候要小心。防止材料脫落。

  2.2.2、如果是固定培養的細菌，可用牙簽挑取所需觀(guān)察的菌落，直接置于2.5%戊二醛固定液中，4℃保存及運輸。挑取的時(shí)候，盡量避免挑取培養基。