肺組織透射電鏡取材注意事項

1、肺組織取材原則：

  肺組織結構較為簡(jiǎn)單，取材前，先查閱文獻，明確實(shí)驗目的，設計好實(shí)驗流程，熟悉組織結構及分布，對需要觀(guān)察的結構需要有組織學(xué)位置判斷。另外，戊二醛會(huì )影響抗原活性，如果課題需要做免疫性的實(shí)驗，取材時(shí)需要用不同的固定液固定。肺組織盡量灌注取材，灌注時(shí)請一定保證灌注充分，灌注不充分效果會(huì )遠低于不灌注。對于未進(jìn)行灌流固定的動(dòng)物最好先進(jìn)行電鏡標本的取材，以免組織自溶，影響超微結構的觀(guān)察。對取材用器材及試劑，進(jìn)行清潔及預冷，寫(xiě)好取材的標簽。取材時(shí)，務(wù)必做到相同條件下取材，相同人員平行操作。固定液一般為2.5%電鏡專(zhuān)用戊二醛，灌流固定選用3%多聚甲醛1%戊二醛。

2、取材器材與試劑：

  冰盒、手術(shù)刀、手術(shù)剪、剃須刀片、EP管、2.5%戊二醛、蠟盤(pán)（光盤(pán)、載玻片均可）、封口膜、吸管、注射器。均4度預冷備用。

3、取材流程（不灌注取材）：

 3.1、取材基本要點(diǎn)：

  小:沒(méi)有方向的組織取材尺寸為1mm×1mm×1mm，有方向的組織為1mm×1mm×3mm為宜，3mm為長(cháng)軸的方向。因為固定液的穿透能力只有0.5mm，若樣品過(guò)大會(huì )使內部固定不良；樣品過(guò)小時(shí)觀(guān)察的目標將受到局限。

  輕:取材刀片要鋒利，一般用剃須刀片，操作應始終貫徹動(dòng)作輕柔。只做直線(xiàn)切割，避免對組織的擠壓及拉鋸，以免引起人工損傷。

  準:電鏡視野非常窄，所以取材的部位一定要準確可靠，根據研究目的要考慮到定位和定向的問(wèn)題。

  冷:4℃操作、保存、送樣。盡量在低溫下操作，降低水解酶的活性，所用容器和器械應預冷，取好的標本放在4℃冰箱保存。

 3.2、肺組織取材具體操作：

  實(shí)驗動(dòng)物麻醉、灌流充分，然后用粗的剪刀將動(dòng)物斷頭,左手捏住大鼠兩耳,右手持剪刀剪開(kāi)胸腔，取出肺組織，用鋒利的刀片切下一塊肺組織置于滴有預冷固定液的蠟板上,切成1立方毫米小塊每組3-5塊。肺泡中通常含有大量空氣，會(huì )造成組織漂浮，固定不充分�？梢杂幂d玻片輕壓組織，排出空氣。（此步操作有可能會(huì )導致結構損傷，也可以用取材后抽氣代替）然后將切成1立方毫米小塊每組3-5塊。最后用牙簽將組織塊逐一放入盛滿(mǎn)固定液的EP管中。如果組織塊依然漂浮在固定液表面，可用紗布將組織塊壓到液面以下。最后將樣品管放入4℃冰箱，固定2～4h后郵寄。郵寄時(shí)固定液充滿(mǎn)EP管，封口膜封口，氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式運輸，冰袋2-3個(gè)（-20℃冰袋，多了會(huì )凍壞樣品），一定要與樣品隔開(kāi)。

灌注取材較為費時(shí)費力。肺組織也可以不灌注取材。流程為：實(shí)驗動(dòng)物麻醉，然后用粗的剪刀將動(dòng)物斷頭,左手捏住大鼠兩耳,右手持剪刀剪開(kāi)胸腔，迅速將預冷的2.5%戊二醛注射到需要觀(guān)測的肺組織處。然后迅速用鋒利的刀片切下注射過(guò)戊二醛的組織并置于滴有預冷固定液的蠟板上,肺泡中通常含有大量空氣，會(huì )造成組織漂浮，固定不充分�？梢杂幂d玻片輕壓組織，排出空氣。（此步操作有可能會(huì )導致結構損傷，也可以用取材后抽氣代替）然后將切成1立方毫米小塊每組3-5塊。最后用牙簽將組織塊逐一放入盛滿(mǎn)固定液的EP管中。如果組織塊依然漂浮在固定液表面，可用紗布將組織塊壓到液面以下。最后將樣品管放入4℃冰箱，固定2～4h后郵寄。郵寄時(shí)固定液充滿(mǎn)EP管，封口膜封口，氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式運輸，冰袋2-3個(gè)（-20℃冰袋，多了會(huì )凍壞樣品），一定要與樣品隔開(kāi)。