神經(jīng)組織透射電鏡取材注意事項

1、神經(jīng)取材原則：

  神經(jīng)組織結構較為復雜，取材前，先查閱文獻，明確實(shí)驗目的，設計好實(shí)驗流程，熟悉組織結構及分布，對需要觀(guān)察的結構需要有組織學(xué)位置判斷。另外，戊二醛會(huì )影響抗原活性，如果課題需要做免疫性的實(shí)驗，取材時(shí)需要用不同的固定液固定。神經(jīng)組織可以不灌注取材，如果灌注，請一定保證灌注充分，灌注不充分效果會(huì )遠低于不灌注。對于未進(jìn)行灌流固定的動(dòng)物最好先進(jìn)行電鏡標本的取材，以免組織自溶，影響超微結構的觀(guān)察。對取材用器材及試劑，進(jìn)行清潔及預冷，寫(xiě)好取材的標簽。取材時(shí)，務(wù)必做到相同條件下取材，相同人員平行操作。固定液一般為2.5%電鏡專(zhuān)用戊二醛，灌流固定選用3%多聚甲醛1%戊二醛。

2、取材器材與試劑：

  冰盒、手術(shù)刀、手術(shù)剪、剃須刀片、EP管、2.5%戊二醛、蠟盤(pán)（光盤(pán)、載玻片均可）、封口膜、吸管、注射器。均4度預冷備用。

3、取材流程（不灌注取材）：

  3.1、取材基本要點(diǎn)：

  小:沒(méi)有方向的組織取材尺寸為1mm×1mm×1mm，有方向的組織為1mm×1mm×3mm為宜，3mm為長(cháng)軸的方向。因為固定液的穿透能力只有0.5mm，若樣品過(guò)大會(huì )使內部固定不良；樣品過(guò)小時(shí)觀(guān)察的目標將受到局限。

  輕:取材刀片要鋒利，一般用剃須刀片，操作應始終貫徹動(dòng)作輕柔。只做直線(xiàn)切割，避免對組織的擠壓及拉鋸，以免引起人工損傷。

  準:電鏡視野非常窄，所以取材的部位一定要準確可靠，根據研究目的要考慮到定位和定向的問(wèn)題。

  冷:4℃操作、保存、送樣。盡量在低溫下操作，降低水解酶的活性，所用容器和器械應預冷，取好的標本放在4℃冰箱保存。

  3.2、神經(jīng)組織取材具體操作：

  實(shí)驗動(dòng)物急性處死或麻醉，用粗的剪刀將動(dòng)物斷頭,左手捏住大鼠兩耳,右手持剪刀從鼠背側頸部將頭皮沿正中線(xiàn)剪開(kāi)，然后用持針器沿鼠頸部著(zhù)手向上剝除顱骨，取出腦組織，用鑷子捏住延髓將腦組織放于預冷的蠟板上，用鋒利的刀片沿大腦縱裂矢狀切為兩半,用注射器將預冷的2.5%戊二醛固定液沖入側腦室預固定,去除側腦室上外側壁的腦組織,將海馬從剩余腦組織上剝離下來(lái),置于滴有預冷固定液的蠟板上,切成1立方毫米小塊每組3-5塊。最 后用牙簽將組織塊逐一放入固定液的EP管中。放入4℃冰箱，固定2～4h后郵寄。郵寄時(shí)固定液充滿(mǎn)EP管，封口膜封口，氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式運輸，冰袋2-3個(gè)（-20℃冰袋，多了會(huì )凍壞樣品），一定要與樣品隔開(kāi)。