植物石蠟切片黃酮染色實(shí)驗步驟

黃酮廣泛存在自然界中的部分植物和漿果中，黃酮類(lèi)化合物具有抗氧化、 抗菌、抗病毒、抗炎、促進(jìn)生長(cháng)以及調節免疫力等多種 生物學(xué)功能。通過(guò)植物石蠟切片，原位染色后熒光顯微鏡下可以直觀(guān)地看到黃酮分布特點(diǎn)，歡迎咨詢(xún)。

1、脫水浸蠟：將樣品整理好放入脫水盒中。將脫水盒放進(jìn)脫水機內依次梯度酒精脫水。75%酒精4h，85%酒精2h，90%酒精2h，95%酒精2h，無(wú)水乙醇I 1h，無(wú)水乙醇II 1h，醇苯混合液5-10min，二甲苯I 5-10min，二甲苯II 5-10min，62℃蠟苯混合液2h，62℃融化石蠟I 4h，62℃融化石蠟II 4h。

2、石蠟包埋：將浸好蠟的組織轉移到包埋機上進(jìn)行包埋。先將少量融化石蠟加入包埋框，待蠟凝固之前將樣品從脫水盒內取出放入包埋框并貼上對應的標簽。于-20°凍臺冷卻，待蠟完全凝固后將蠟塊從包埋框中取出并修整蠟塊。

3、石蠟切片：將修整好的蠟塊夾到石蠟切片機切片上，根據實(shí)驗目的不同，切片厚度5-10μm進(jìn)行切片。蠟帶漂浮于攤片機40℃ 溫水上將組織攤平，然后用防脫載玻片將組織撈起，于60℃烘箱內烤片。水烤干蠟烤化后取出常溫保存備用。

4、黃酮染色液配置方法：PBS緩沖液配置10%蔗糖、2%DMSO混合液，然后稱(chēng)取0.5g二苯基硼酸-2-氨基乙酯，溶于100ml混合液中，即為0.5%二苯基硼酸-2-氨基乙酯染色液。

5、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min，二甲苯Ⅱ15min，無(wú)水乙醇Ⅰ5min，無(wú)水乙醇Ⅱ5min，85%酒精5min，75%酒精5min，蒸餾水洗。

6、黃酮染色：樣品切片PBS沖洗2次，每次1min，然后滴加黃酮染色液至切片上，室溫避光染色，10min，完成后PBS沖洗2次，每次1min，抗熒光淬滅封片劑封片，避光保存。    

7、數據采集：切片于顯微鏡玻片掃描儀霞，使用激發(fā)波長(cháng)488進(jìn)行拍照。

8、實(shí)驗結果：見(jiàn)百度網(wǎng)盤(pán)鏈接。

附：結果判讀——黃色熒光為黃酮表達信號。