在生命科學(xué)領(lǐng)域，外泌體作為細(xì)胞間通訊的關(guān)鍵介質(zhì)備受關(guān)注。這種納米級(jí)脂質(zhì)雙層膜小泡廣泛存在于人體細(xì)胞，參與物質(zhì)運(yùn)輸和信號(hào)傳遞，深入研究外泌體有助于揭示生命奧秘與疾病機(jī)制。外泌體電鏡檢測(cè)技術(shù)則為我們打開了觀察外泌體微觀結(jié)構(gòu)的大門。
一、檢測(cè)原理
電鏡技術(shù)以電子成像，分辨率可達(dá)納米級(jí)，能展現(xiàn)生物樣品超微結(jié)構(gòu)。外泌體檢測(cè)中，電鏡發(fā)射的高能電子束穿透樣品，電子與原子作用產(chǎn)生散射信號(hào)成像。電鏡技術(shù)主要有透射電鏡（TEM）、掃描電鏡（SEM）、低溫透射電鏡和原子力顯微鏡（AFM）等。其中，透射電鏡因無需樣品導(dǎo)電，可直接觀察超薄樣品，是外泌體鑒定中應(yīng)用廣泛且成熟的技術(shù)。
二、檢測(cè)重要性
外泌體在疾病診斷、治療及生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中潛力巨大。電鏡檢測(cè)能鑒定外泌體形態(tài)、大小和表面特征，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。比如在疾病診斷時(shí)，病變細(xì)胞分泌的外泌體形態(tài)和大小會(huì)改變，電鏡可捕捉這些差異輔助早期診斷；藥物研發(fā)中，電鏡檢測(cè)能獲取外泌體作為藥物載體的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)和特性信息。
三、檢測(cè)流程
樣本處理：樣本來源豐富，如細(xì)胞培養(yǎng)液、血液和尿液等。先通過離心分離去除細(xì)胞碎片和大顆粒，獲取外泌體沉淀，關(guān)鍵在于控制離心條件，避免破壞外泌體結(jié)構(gòu)。
固定與清洗：用戊二醛或鋨酸固定外泌體，維持其形態(tài)結(jié)構(gòu)，再用緩沖液清洗，去除雜質(zhì)和殘留固定劑。
脫水與包埋：用乙醇和丙酮依次脫水，增強(qiáng)電子信號(hào)，然后將外泌體包埋在環(huán)氧樹脂中，確保其均勻分布且位置適宜切片觀察。
切片與染色：用超薄切片機(jī)將包埋的外泌體切成 50 - 100nm 的薄片，再用醋酸鈾和檸檬酸鉛等金屬染料染色，增強(qiáng)圖像對(duì)比度。
電鏡觀察與數(shù)據(jù)分析：在透射電鏡下觀察染色切片，記錄外泌體形態(tài)、大小和內(nèi)部結(jié)構(gòu)，并用圖像分析軟件統(tǒng)計(jì)分析，得出科學(xué)結(jié)論。
四、優(yōu)勢(shì)與局限
優(yōu)勢(shì)：能直觀呈現(xiàn)外泌體形態(tài)結(jié)構(gòu)，高分辨率可清晰展示雙層膜、表面突起等細(xì)節(jié)，便于準(zhǔn)確鑒定，還能對(duì)比不同樣本外泌體差異，提供豐富研究數(shù)據(jù)。
局限：檢測(cè)成本高，依賴專業(yè)設(shè)備和技術(shù)人員，限制了其在部分實(shí)驗(yàn)室的普及。而且電鏡只能展示局部，無法涵蓋全部外泌體，另外，支原體、鐵蛋白聚團(tuán)等與外泌體電鏡圖像相似，易造成誤判。
五、應(yīng)用領(lǐng)域
疾病診斷與治療：腫瘤研究中，電鏡檢測(cè)腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體可尋找腫瘤特異性標(biāo)志物，用于早期診斷和預(yù)后評(píng)估；分析腦脊液中外泌體變化，有助于了解神經(jīng)系統(tǒng)疾病機(jī)制，為治療提供新思路。
生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究：研究細(xì)胞間通訊時(shí)，電鏡能觀察外泌體傳遞過程，助力了解細(xì)胞間信息交流機(jī)制；干細(xì)胞研究中，電鏡檢測(cè)可探究干細(xì)胞分泌的外泌體對(duì)細(xì)胞分化和組織修復(fù)的作用。
外泌體電鏡檢測(cè)技術(shù)為外泌體研究提供了關(guān)鍵支持。盡管存在局限，但隨著技術(shù)發(fā)展，未來有望在生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮更大作用，助力揭示更多外泌體奧秘，推動(dòng)相關(guān)研究和應(yīng)用進(jìn)步。
