在植物科學(xué)研究里,植物石蠟切片技術(shù)極為關(guān)鍵,它像一把鑰匙,幫我們打開(kāi)了植物微觀世界的大門(mén)。
植物石蠟切片技術(shù)是經(jīng)典的組織學(xué)制片方法,通過(guò)一系列處理,把植物材料切成極薄切片,用于顯微鏡觀察。借此技術(shù),我們能看清植物細(xì)胞形態(tài)、排列,以及不同組織間的關(guān)系,為植物生長(zhǎng)發(fā)育、生理功能、病理變化等研究提供重要形態(tài)學(xué)依據(jù)。
操作流程
取材:要選新鮮、生長(zhǎng)良好的植物組織,如根尖、莖尖、葉片等,且動(dòng)作要快,保護(hù)組織活性與完整性。
固定:切下材料馬上放入固定液,像常用的福爾馬林 - 醋酸 - 酒精混合液(FAA),快速殺死細(xì)胞,保留細(xì)胞結(jié)構(gòu)。固定時(shí)間依材料大小和類型而定,小材料數(shù)小時(shí),大材料 1 - 2 天。
脫水:用從低到高濃度的酒精溶液依次處理材料,去除水分,否則石蠟難以滲入。從 70% 酒精開(kāi)始,經(jīng) 85%、95% 到 100% 酒精,各濃度停留一定時(shí)間。
透明:脫水后用二甲苯等透明劑替換酒精,讓材料變透明。但透明時(shí)間不能太長(zhǎng),否則材料變脆。
浸蠟:將透明材料放入熔化石蠟,多次換純石蠟,讓石蠟充分浸潤(rùn)組織。浸蠟溫度和時(shí)間要嚴(yán)格控制。
包埋:把浸蠟材料放包埋模具,倒入石蠟,冷卻凝固后組織就被包在石蠟塊里,注意擺放位置。
切片:用切片機(jī)把石蠟塊切成 5 - 10 微米的薄片,需熟練操作,保證厚度均勻,無(wú)褶皺、斷裂,切片刀鋒利度也影響切片質(zhì)量。
貼片:把切好的薄片貼在載玻片上,加熱使石蠟融化,去除氣泡。
染色:常用番紅 - 固綠對(duì)染法,番紅染細(xì)胞核為紅色,固綠染細(xì)胞質(zhì)為綠色,便于觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu),染色時(shí)間和濃度要依實(shí)際調(diào)整。
封片:染色切片經(jīng)脫水、透明后,滴中性樹(shù)膠,蓋蓋玻片,保護(hù)切片以便長(zhǎng)期保存。
應(yīng)用領(lǐng)域
植物發(fā)育生物學(xué):觀察不同發(fā)育階段組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化,了解植物器官形成和細(xì)胞分化機(jī)制。
植物病理學(xué):研究植物病害時(shí),觀察病原菌侵染途徑和植物病變反應(yīng),助力病害診斷與防治。
植物分類學(xué):依據(jù)細(xì)胞和組織特征為植物分類提供形態(tài)學(xué)證據(jù),輔助確定分類地位。
注意事項(xiàng)
材料選擇與處理:保證材料新鮮、無(wú)病蟲(chóng)害,取材、固定等操作要規(guī)范,避免損傷材料。
試劑使用:固定液、脫水劑等試劑濃度、純度和用法要準(zhǔn)確,否則影響切片質(zhì)量甚至致實(shí)驗(yàn)失敗。
切片操作:切片是關(guān)鍵,操作人員需經(jīng)訓(xùn)練,熟練掌握切片機(jī)使用,有好手感和耐心。
染色控制:根據(jù)染色方法和材料特點(diǎn),控制好染色時(shí)間、濃度和溫度,獲得清晰染色效果。
植物石蠟切片技術(shù)是植物科學(xué)研究的重要基礎(chǔ)技術(shù),隨著科技發(fā)展不斷改進(jìn),未來(lái)會(huì)在植物研究各領(lǐng)域發(fā)揮更大作用,助力探索植物未知奧秘。