實(shí)驗室中常見(jiàn)的外泌體提取方法介紹

　　外泌體是活細胞分泌的直徑為40-150nm的雙脂膜結構的小泡。外泌體廣泛存在于各種體液中，如外周血、腹水、尿液、唾液、腦脊液等。分泌物傳遞外的一種功能性分子，包括蛋白質(zhì)、脂類(lèi)和核酸受體等細胞，參與細胞間的通訊，影響細胞的各種生理和病理功能，因此引起了許多研究者的關(guān)注，進(jìn)一步研究體外分泌器能否獲得高純度是至關(guān)重要的，下面為大家介紹實(shí)驗室常用的外泌體提取方法。

　　目前實(shí)驗室分離外泌體常用的方法有:超離心法、聚合物沉淀法、分子排斥法、超濾法等，下面依次介紹。

　　超速離心分離:超離心法是目前最常用的分離分泌物體的方法之一，該方法廣泛應用于各種生物樣品，如血清、血漿、尿液、唾液、細胞培養和腦脊液的分析，也是目前分離方法中的“金標準”，據估計，采用超離心法分離體外泌體的研究人員占全部方法的56%。

　　優(yōu)點(diǎn):該方法不需要標記外泌體或使用其他分離試劑，不易被污染。該方法適用于大劑量樣品分離，外泌體純度高。

　　缺點(diǎn):耗時(shí)和勞動(dòng)密集型，高度依賴(lài)手工勞動(dòng)，回收率低，由于超高速離心，外泌體容易破壞結構和功能，并容易聚集成塊，不利于下游分析。(雖然它是黃金標準，但也有許多缺點(diǎn))

　　聚合物沉淀方法:聚合物沉淀的原理是聚合物被水分子“劫持”，導致分泌體外的溶解度降低，因此在低速離心沉淀的條件下，畫(huà)面非常清晰，不僅僅是分泌體外的水分子在體表，一些雜蛋白在水分子表面，所以加入聚合物后，機體外與雜蛋白分泌聚集在一起并離心沉淀下來(lái)，因此，沉淀法獲得的外泌體純度是一個(gè)硬傷口。許多公司已經(jīng)開(kāi)發(fā)了一系列用于不同樣本來(lái)源(血清、血漿、細胞培養、尿液等)的外泌體提取試劑盒，可用于提取外泌體核酸，但不能用于外泌體蛋白質(zhì)譜分析。

　　優(yōu)點(diǎn):無(wú)需大型昂貴設備，大劑量樣品加工，使用方便，操作簡(jiǎn)單，成本低。

　　缺點(diǎn):純度和回收率低，蛋白質(zhì)雜性多，粒徑不均勻，聚合物難以去除，影響下游分析。

　　分子排阻的方法:在分子排斥法中，大分子不能進(jìn)入凝膠孔，并迅速被流動(dòng)相沿著(zhù)多孔凝膠之間的空隙避開(kāi)，而小分子可以進(jìn)入凝膠孔，并被保留和洗脫較慢。液分離粒度液之間的差異和其他蛋白質(zhì),即液與大粒徑將篩選了第一,而蛋白質(zhì)與小粒徑將篩選了之后,將分離液和高純液和蛋白質(zhì)之間的顆粒大小的差異。實(shí)驗室的朋友們可以選擇填充劑并建立自己的色譜柱，如果這種方法太貴，外泌體分離試劑盒也可用。

　　優(yōu)點(diǎn):外泌體純度高，結構不受破壞。

　　缺點(diǎn):它可以與其他類(lèi)似大小的顆�；旌�，如乳糜微粒、低密度脂蛋白微粒等。

　　超濾方法:超濾法是將溶劑和小分子物質(zhì)過(guò)濾到膜的另一側，將相對較大的分子物質(zhì)攔截在超濾膜中，以達到分離的目的。外泌體的直徑為40~150nm，比一般蛋白大。我們可以用孔徑小于150nm的超濾膜通過(guò)低速和長(cháng)期離心分離樣品中的外泌體。

　　優(yōu)點(diǎn):該工藝操作方便、速度快、成本低、使用方便、富集效率高。

　　缺點(diǎn):膜容易丟失和變形，堵塞的可能性大，大顆粒蛋白質(zhì)污染嚴重，容易粘膜而丟失。